Рекомбинантная ДНК и рестриктазы

К 1972 году Анни Чанг, Поль Берг и Сеймур Коэн установили, что с помощью рестрикционных ферментов, рестриктаз, можно порезать две любые молекулы ДНК и сделать из их одну реком-бинантную ДНК. Конкретно это открытие легло в базу новейшей технологии, революционным образом преобразившей современную генетику и молекулярную биологию. Способ основан на Рекомбинантная ДНК и рестриктазы стремлении комплементарных одинарных цепей нуклеиновых кислот объединиться меж собой. Так, в растворе нуклеиновых кислот цепь с последовательностью GCTAT объединится с цепью CGATA. Повышенное внимание следует уделить тому, как рестриктазы режут ДНК. Вспомним, что большая часть рестриктаз разрезают симметричные палиндромные куски и нередко оставляют недлинные одинарные комплементарные концы цепей длиной в два—четыре Рекомбинантная ДНК и рестриктазы основания. К примеру, фермент Sail разрезает ДНК последующим образом:

Все молекулы ДНК, порезанные этой рестрикта-зой, будут иметь одинарные куски с схожей последовательностью. Эти концы могут соединяться средством водородной связи, даже если они очень недлинные. Потому если порезать две ДНК различных организмов одним ферментом и потом перемешать их Рекомбинантная ДНК и рестриктазы, то можно получить много рекомбинантных молекул, составленных из ДНК обоих видов.

На практике опыт, обычно, сосредоточен на ДНК отдельного организма-донора, к примеру мыши либо человека. Эту ДНК изолируют и проводят над ней разные операции. Выделить ДНК из организма донора просто: довольно повредить клеточки и с помощью этанола Рекомбинантная ДНК и рестриктазы выделить осадок ДНК. Потом донорскую ДНК обрабатывают рестриктазой, чтоб она поделилась на маленькие куски и эти маленькие куски вставляют в мелкие реплицирующие молекулы ДНК, служащие вектором (лат. vector — несущий); векторные молекулы переносят интересующую ученых ДНК, с которой можно экспериментировать. Векторы могут реплицироваться, другими словами наращивать количество донорских фрагментов и Рекомбинантная ДНК и рестриктазы предоставлять много копий для анализа. Более нередко использующиеся векторы — плазмиды, с которыми мы познакомились в гл. 10, другими словами мелкие кольцевые ДНК, встречающиеся в микробах и нередко переносящие гены стойкости к лекарствам. Плазмиды не являются частью основного генома микробов, так как встречаются штаммы, как с плазмидами, так и без их. Благодаря Рекомбинантная ДНК и рестриктазы малому размеру и кольцевой структуре плаз-мидных ДНК их просто отделить от геномной ДНК микробов. В качестве векторов также нередко употребляют мелкие вирусные ДНК.

Порезав донорскую ДНК на куски с помощью рестриктазы, той же рестриктазой режут векторную молекулу, имеющую один участок, соответственный рестриктазе. Потом раствор 2-ух ДНК соединяют и получают Рекомбинантная ДНК и рестриктазы некое количество рекомбинантных молекул ДНК — это и есть векторы со интегрированным донорским куском:

Такие вставки нестабильны, но если добавить фермент ДНК-лигазу, то он соединит каркас молекул ДНК и сделает связь крепкой. В приобретенном растворе имеется огромное количество векторных молекул с разными донорскими вставками. Последующим шагом нужно Рекомбинантная ДНК и рестриктазы ввести эти рекомбинантные молекулы в живы клеточки, где они могли бы реплицироваться. Если в качестве векторов употребляют плазмиды, то раствор рекомбинантной ДНК просто добавляют в культуру микробов без плазмид, обычно Е. coli. При соответствующей обработке клеточки впитывают рекомбинантные векторы через стены и мембраны. Обычно в одну клеточку просачивается только одна Рекомбинантная ДНК и рестриктазы молекула. После посева в чашечки клеточки вырастают и делятся, увеличивая количество плазмид и вставок в их. Любая из получившихся колоний микробов является клоном ДНК, другими словами популяцией схожих бактериальных клеток, в какой плодится кусок донорской ДНК.

Ученые ведут учет этим колониям и сохраняют их. Вкупе они образуют геномную библиотеку (банк Рекомбинантная ДНК и рестриктазы). Если выведено и собрано достаточное количество колоний, то существует возможность, что любая отдельная часть донорского генома представлена в библиотеке хотя бы один раз. Так можно составить библиотеку геномной ДНК мыши, куски которой представлены в виде вставок в плазмидные векторы снутри клеток микробов.

Последующий шаг почти во Рекомбинантная ДНК и рестриктазы всем находится в зависимости от цели опыта. С некими способностями мы познакомимся ниже.


reklama-na-marshrutnoj-karte.html
reklama-na-rinke-truda-referat.html
reklama-organizacionno-ekonomicheskie-aspekti.html